Изучение некоторых биохимических показателей крови средиземноморской черепахи никольского (testudo graeca nikolskii, 1986), содержащейся в полувольных условиях сафари-парка
На территории Краснодарского края существует целый ряд программ по сохранению краснокнижных видов животных, увеличению их популяций и возвращению этих видов в естественную среду обитания. Такая работа по адаптации и размножению краснокнижных видов проводится в районе Мархотхского хребта (г. Геленджик), где в полувольных условиях содержится краснокнижный вид средиземноморской черепахи Никольского (T. graeca Nikolskii) [1, 2, 4].
Черепахи (лат. Testudines) относятся к наиболее древней группе современных рептилий. Они появились в триасовом периоде, более двухсот миллионов лет назад, и, почти не изменившись, дожили до нашего времени. В ходе эволюции они переходили от наземного к водному образу жизни и, наоборот, возвращались из воды на сушу.
На территории Российской Федерации средиземноморская черепаха Никольского (Testudo graeca Nikolskii) встречается на Кавказе, где ее ареал представлен двумя изолированными участками: один находится на черноморском побережье от Анапы до Сухуми; второй включает Восточную Грузию, Армению. Из долины Аракса в Армении описана армянская черепаха, Testudo graeca Armeniaca Ckhikhvadze et Bakradze, 1991 [1, 13].
Однако, на сегодняшний день численность черепах начала быстро сокращаться в результате резкого увеличения антропогенной нагрузки. Так, состояние подвида T. graeca Nikolskii является крайне неблагополучным. Его ареал существенно сократился и разделен на ряд, вероятно, изолированных популяций, численность которых неуклонно снижается [5, 6].
Основным фактором, негативно влияющим на сохранение средиземноморской черепахи, является деградация мест обитания в результате интенсивного рекреационного использования и хозяйственного освоения территорий в пределах ее ареала [8].
Для предотвращения снижения численности вида были созданы полувольные условия с целью изучения морфологии и физиологии данного краснокнижного вида. Актуальными остаются вопросы кормления черепах с использованием кормовых добавок и пробиотиков, для профилактики заболеваний различной этиологии [11, 12].
Не изучены вопросы, связанные с влиянием внешней среды на иммунный статус, жизненный цикл, развитие, заболеваемость и выживаемость черепахи. Так, актуальными представляются вопросы влияния гельминтов и эктопаразитов, паразитирующих на сухопутной черепахе T. graeca и их воздействие на численность популяции. Не изученными остаются вопросы иммунитета черепах, содержащихся в полувольных условиях Сафари-парка, где необходимо постоянно осуществлять ветеринарно-санитарный контроль за состоянием здоровья черепах на всех стадиях развития.
В доступной нам литературе мы не нашли сведений по изучению биохимических показателей у краснокнижной черепахи Никольского, а также влияния иммунного статуса на плодовитость самок, устойчивость к гельминтозным и паразитарным заболеваниям черепах.
Д.А. Бондаренко указывал, что к паразитам черепахи в большинстве случаев относятся индифферентно. Однако высокая численность гельминтов может способствовать ослаблению организма [3].
Изучение биохимических показателей, которые нужно учитывать при анализе иммунного статуса черепах имеет большое значение при диспансеризации рептилий, содержащихся в полувольных условиях сафари-парков.
Нами изучены такие биохимические показатели как общий белок, щелочная фосфатаза и уровень креатинина, которые варьировали у черепах в широких пределах. Вероятнее всего, эти показатели в большей степени зависят от их возраста, чем от условий, в которых они содержатся. Уровень калия, кальция и фосфора в крови обследованных черепах был более стабильным. В связи с полученными данными необходимо индивидуально контролировать биохимические показатели крови каждой особи и продолжать поиск более наглядных биохимических тестов иммунного статуса черепах.
В связи с вышеизложенным перед нами была поставлена задача изучить основные биохимический показатели крови, а также влияние этих показателей на состояние здоровья черепах.
Материалы и методы. Исследования проведены на базе Геленджикского сафари-парка на группе черепах Никольского, содержащихся в полувольных условиях. Исследования проводили на группе из 18-ти черепах, постоянно проживающих в вольере Сафари-парка (рисунок 1, 2, 3, 4, 5, 6). Состояние здоровья черепах изучали комплексно, учитывали клинические признаки, массу тела, поведение особей, поедаемость корма. Показатели крови черепах изучались на гематологическом анализаторе MindrayBC-2800vet и биохимическом анализаторе StatFax 1904+R. Исследованы такие показатели как гамма-глутамил транспептидаза (ГГТ), лактатдегид-рогеназа (ЛДГ), аспартатаминотрансфераза-(АСТ), мочевина и хлориды.
Обсуждение полученных данных. С 2010 года нами проводятся наблюдения за состоянием данного краснокнижного вида, особенностями поведения и питания, осуществляется мониторинг основных заразных и незаразных заболеваний. Проводятся эксперименты по искусственному выведению черепах в условиях полуволь-ного содержания. Изучается влияние различных антигельминтных и противопаразитарных препаратов на организм черепах [7, 9, 10]. В 2011 году впервые в условиях вольера было получено потомство
средиземноморской черепахи: 2 новорожденных сеголетка. В 2014 году от черепах, содержащихся в вольере по разработанной нами технологии [9, 10], впервые были выведены сеголетки, которые успешно перезимовали. Для получения специального разрешения Министерства природных ресурсов и экологии Российской Федерации на то, чтобы выпускать черепах в естественную среду обитания, необходима гарантия, что животные способны адаптироваться к жизни в естественной среде обитания. С этой целью нами осуществляется строгий ветеринарно-санитарный контроль за состоянием здоровья черепах. В данной статье приводятся данные по результатам исследования биохимических показателей краснокнижного вида - черепахи Никольского. Основная цель программы доведение популяции черепах до такой численности, чтобы их можно было выпускать в естественную среду обитания, не опасаясь за существование этого краснокнижного вида. Одним из факторов лимитирующих размножение черепахи Никольского являются различные заболевания [3, 7, 9]. В полувольных условиях необходимо постоянно осуществлять ветеринарно-санитарный контроль над состоянием здоровья черепах на всех стадиях развития. Для изучения иммунного статуса земноводных проведен анализ таких показателей как гамма-глута-мил транспептидаза (ГГТ), лактатдегидрогеназа (ЛДГ), аспартат-ами-нотрансфераза-(АСТ), мочевина и хлориды.
ЛДГ или лактатдегидрогеназа, фермент, участвующий в процессе окисления глюкозы и образовании молочной кислоты. Лактат (соль молочной кислоты) образуется в клетках в процессе дыхания. ЛДГ содержится почти во всех органах и тканях животных и человека, особенно много его в мышцах. При полноценном снабжении кислородом лактат в крови не накапливается, а разрушается до нейтральных продуктов и выводится. В условиях гипоксии накапливается, нарушает процесс тканевого дыхания. Анализ биохимии крови на ЛДГ проводят для диагностики заболеваний миокарда, печени, опухолевых заболеваний. У черепах в доступной литературе нами не найдено результатов исследований ЛДГ. В связи с этим за норму нами взяты показатели из медицинской практики (норма ЛДГ - до 250 Ед/л).
Увеличение ЛДГ происходит при циррозе печени, инфаркте миокарда и заболеваниях кровеносной системы - анемии, атрофии, заболеваниях почек, злокачественных опухолях различных органов, гипоксиях, анемиях.
ГГТ - это гамма-глутамилтранспептидаза - аномально высокий или низкий уровень может указывать на заболевание костей и печени. Исследования гамма-глутамилтранспептидазы у черепах также не проводилось. Из медицинской практики известно, что нормальный уровень ГГТ находится в диапазоне от 0 до 45 МЕ/л. Тест на определение уровня ГГТ проводится с целью дифференцировать заболевания печени от заболеваний скелета, когда в сыворотке крови уровень щелочной фосфатазы увеличивается.
Аспартатаминотрансфераза (далее, АСТ) - фермент, участвующий в обмене аминокислот. Катализирует перенос аминогруппы от аспарагиновой кислоты на альфа-кетоглутаровую кислоту с образованием щавелевоуксусной кислоты и глутаминовой кислот. Фермент содержится в тканях сердца, печени, скелетной мускулатуры, нервной ткани и почек, в меньшей степени - в поджелудочной железе, селезёнке и лёгких. В эритроцитах аспартатаминотрансфераза содержится в количестве в 10 раз больше, чем в сыворотке.
В доступной литературе нам не удалось найти результатов исследований АСТ у черепах, в связи с этим за основу нормальных показателей нами взяты медицинские показатели - 35-40 МЕ.
Мочевина - осмотически активное вещество, играющее важную роль в механизмах концентрирования мочи. Выводится мочевина преимущественно почками. Уровень её в крови обусловлен соотношением процессов образования и выведения. В клинической диагностике определение мочевины в крови обычно используют для оценки выделительной функции почек. Образование мочевины зависит от характера питания: при преобладании в диете белковых продуктов концентрация мочевины может повышаться до верхних границ нормы, а при растительной диете - снижаться. При патологии печени вследствие нарушения ее синтетической способности уровень мочевины в крови может снижаться. С возрастом уровень мочевины повышается. Уровень мочевины в крови в норме варьирует от 1,8 до 7,5 ммоль/л.
Определение хлоридов в крови назначают для диагностики заболеваний почек. Содержание хлора в организме зависит от баланса процессов: поступления с пищей, распределения в организме и выведения с хлора мочой и калом. Норма хлора в сыворотке крови - 98 - 107 ммоль/л. Значительное повышение уровня хлора крови вызывает следующие патологические состояния в организме: обезвоживание (недостаточное поступление воды в организм), острая почечная недостаточность, алкалоз - заболевание, связанное с повышением уровня щелочных элементов - хлора.
Нехватка хлора в крови организма может развиться на фоне различных нарушений работы организма: ацидоз (заболевание, связанное с повышенным выведением хлора почками с мочой), почечная недостаточность (при полиурии), травмы.
Данные по результатам исследования представлены в таблице 1 и на рисунках 1 и 2.
Таблица 1. Биохимические показатели крови средиземноморской черепахи Никольского (Testudo graeca Nikolskii)