Содержание цитокинов в околоплодных водах у беременных с задержкой роста плода
В статье представлен анализ зависимости состава микрофлоры в отделяемом цервикального канала и околоплодных водах и содержания провоспалительных и противовосралительных цитокинов в околоплодных водах при ЗРП. Предпринята попытка оценить роль цитокинов в прогнозировании исходов у детей с гипотрофией в неонатальном периоде, в частности, в прогнозировании реализации ВУИ у этих новорожденных.
Функциональная недостаточность плаценты оказывает прямое отрицательное воздействие на развитие плода и новорожденного. Так, по данным Барашнева Ю.И. (2001), при декомпенсированной форме фетоплацентарной недостаточности перинатальная смертность достигает 50%, а заболеваемость новорожденных 100%. Плацентарная недостаточность (ПН) проявляется характерной клинической симптоматикой, в частности синдромом задержки роста плода (ЗРП). Частота ЗРП по данным многих авторов колеблется от 3% до 22% у доношенных, от 18 до 24% у недоношенных, и не имеет тенденции к снижению [3,5,6].
ЗРП, как декомпенсированная фаза недостаточности плаценты и её ложа, основная причина перинатальной смертности недоношенных маловесных детей и 100% заболеваемости выживших новорожденных (Н.М. Старцева, 2006) также является фактором риска повышения заболеваемости на протяжении предстоящей жизни. Кроме того, у детей, родившихся маловесными, сокращается средняя продолжительность предстоящей жизни, в сравнении с детьми, не имевшими дефицита веса при рождении [7]. В структуре перинатальной смертности 23% – 25% занимает ЗРП и связанные с этой патологией осложнения. У 32,5% детей, родившихся с гипотрофией, в возрасте одного года сохраняются отклонения в физическом развитии.
Состояние здоровья детей с синдромом задержки роста плода указывает на необходимость пристального изучения особенностей ведения и родоразрешения беременных с ХПН, с применением современных перинатальных технологий, в том числе имеющих прогностическое значение.
По данным Газазян и др. (2008) диагностика внутриутробной инфекции представляет значительные трудности и возможна лишь при сочетании данных клинических, инструментальных и лабораторных исследований. Пи этом одним из информативных показателей прогнозирования степени риска ВУИ является определение цитокинов (TNF-?, IL-1?) в сыворотке крови и околоплодных водах беременных с урогенитальной инфекцией.
Актуальность проблемы обусловлена сохраняющимися высокими показателями перинатальной смертности и заболеваемости при ЗРП, что связано с малым количеством эффективных прогностических тестов при ЗРП На высокую перинатальную заболеваемость влияет отсутствие прогнозирования развития различных осложнений в перинатальном и неонатальном периодах.
Необходимо отметить, что, снижая перинатальную смертность среди маловесных детей, часто не удается снизить их заболеваемость в неонатальном периоде, что в целом ведет к снижению показателей здоровья у этих детей.
Таким образом, улучшение перинатальных исходов зависит от грамотного и своевременного применения новых перинатальных технологий, помогающих в прогнозировании исходов у детей с гипотрофией в неонатальном периоде.
Целью настоящего исследования явилось изучение резервов использования современных иммунологических методов исследований в прогнозировании исходов у беременных с ЗРП.
Программа исследования включала в себя клинико-статистический анализ данных, полученных при ультразвуковой фето- и плацентометрии, микроскопии отделяемого цервикального канала, данные бактериологического исследования околоплодных вод и отделяемого цервикального канала, определение уровней цитокинов в околоплодных водах, морфологическое и морфометрическое исследование плаценты.
Околоплодные воды получали путем амниотомии до начала родовой деятельности (программированные роды), в родах (при безводном промежутке менее 6 часов) или перед кесаревым сечением при отсутствии безводного промежутка. Затем проведена математическая обработка результатов.
Материалы и методы:
Для выполнения задач исследования было обследовано 116 беременных в сроки 35-40 недель гестации в родильном отделении ГКБ № 29 за период с 1 января 2007 по 31 декабря 2007 гг., где осуществляли динамическое наблюдение в стационаре. Все пациентки были госпитализированы в отделение патологии беременности (ОПБ) ГКБ № 29 в сроке 35 – 40 недель.
Пациентки были разделены на две группы.
- Контрольная группа - 78 пациенток (67,3%) с беременностью, протекавшей без серьезных осложнений и завершившейся физиологическими родами.
- Основная группа – 38 пациенток с доношенной беременностью и ЗРП. Степень ЗРП у беременных основной группы представлена в табл. 1. Диагноз ЗРП устанавливали при условии, что вес новорожденного был ниже 10 перцентиля для данного гестационного возраста (В.А. Доскин и др.1997).
Табл. 1. Степень ЗРП у беременных основной группы
n ЗРП I степени ЗРП II степени ЗРП III степени Доношенная беременность и ЗРП 38 22 (58%) 6 (16%) 10 (26%)
Для определения уровня цитокинов в околоплодных водах использовали наборы реагентов «ИФА-БЕСТ», производимые ЗАО «ВЕКТОР-БЕСТ» (Россия, Новосибирск) и наборы реагентов «ProCon» ООО «Протеиновый контур» (Россия, Санкт-Петербург). Наборы представляют собой комплекты, основными реагентами которых являются моноклональные антитела к различным цитокинам (а-ФНО, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-1РА, ИЛ-2, ИЛ-10, ИЛ- 1В), сорбированные на поверхности лунок разборных полистирольных планшетов.На первой стадии анализа исследуемые и контрольные образцы инкубировали в лунках с иммобилизованными антителами. Имевшиеся в образцах цитокины связывались с иммобилизованными антителами. Несвязавшийся материал был удален отмывкой. Связавшиеся цитокины взаимодействовали при инкубации с коньюгатом №1 (антитела к цитокинам человека с биотином). Несвязавшийся коньюгат №1 удален отмывкой. На третьей стадии связавшийся коньюгат №1 взаимодействовал при инкубации с коньюгатом №2 (стрептавидин с пероксидазой хрена). После третьей отмывки количество связавшегося коньюгата №2 определяли цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы хрена – перекиси водорода и хромогена – тетраметилбензидина. Реакцию останавливали добавлением раствора стоп-реагента и измеряли оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм. Интенсивность желтого окрашивания пропорциональна количеству содержащегося в образце цитокина.
Материал для бактериоскопического исследования получали из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища. Забор материала производили желобоватым зондом. Из заднего свода влагалища отделяемое забиралось шпателем. Полученный материал наносили на предметные стекла, и после высушивания окрашивали по Граму. Бактериоскопию осуществляли при помощи светового микроскопа с использованием иммерсионной системы.
Проводили бактериологическое исследование отделяемого цервикального канала и окодоплодных вод. Материал из цервикального канала брали в стерильную пробирку со средой и помещали в термостат для инкубации при температуре 37.0 С в течение 72 часов. Далее определяли качественный и количественный состав микрофлоры, с последующим определением чувствительности микроорганизмов к антибиотикам различных групп.
Исследование плацент проводили по стандартизированной схеме, которая включала макроскопический анализ, вырезку материала и его гистологическое изучение: определение зрелости плацент, а по совокупности величин массы плода, плаценты, степени зрелости или незрелости ворсин, выраженности компенсаторных реакций и инволютивных изменений определяли степень ПН.
Результаты и их обсуждение
Определение уровня цитокинов в околоплодных водах и отделяемом цервикального канала проводилось в сопоставлении со степенью чистоты влагалища и цервикального канала. Так, микроскопия мазка по Грамму у обследованных показала следующие результаты (табл.2).