ГОСТ 31481-2012 Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
Текст ГОСТ 31481-2012 Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ
INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARTIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION
КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ
Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты
межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»
Сведения о стандарте1 РАЗРАБОТАН Научно-исследовательским институтом прикладной и экспериментальной экологии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» (ФГОУ ВПО «Кубанский ГАУ»)
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол №41 от 23—24 мая 2012 г.)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97
по МК (ИСО 3166) 004—97
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Госстандарт Республики Беларусь
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 октября 2012 г. № 474-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31481—2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52698—2006
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в указателе «Национальные стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты», а текст изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты»
В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии
1 Область применения. 1
2 Нормативные ссылки. 1
4 Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов. 2
5 Оформление результатов анализа. 8
6 Контроль качества результатов измерений. 8
7 Требования к квалификации оператора. 9
8 Условия выполнения анализа. 9
9 Требования безопасности. 9
Приложение А (обязательное) Аппарат АПЛ для экстракции и очистки экстрактов пестицидов
перегонкой с водяным паром. 10
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидовMixed fodders, raw stuff for mixed fodders. Method for determining the residual quantities of chlorine-organic pesticides
Дата введения — 2013—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов: альфа-изомера гексахлорцик-логексана (а-ГХЦГ), гамма-изомера гексахлорцикпогексана (у-ГХЦГ), 4,4'-дихлордифенилтрихлорэта-на (ДДТ) и его метаболитов: 4,4'-дихлордифенилдихлорэтана (ДДД) и 4,4'-дихлордифенилдихлор-этилена (ДДЭ) с применением газожидкостной хроматографии.
Диапазоны измеряемых концентраций и минимально детектируемые количества определяемых соединений представлены в таблице 1.
Таблица 1 —Диапазоны концентраций хлорорганических пестицидов
Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг
Минимально детектируемые количества,
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005—88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.030—81 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Защитное заземление, зануление
ГОСТ 1770—74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 2603—79 Реактивы. Ацетон. Технические условия
Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия Реактивы. Кислота серная. Технические условия Реактивы. Калий двухромовокислый. Технические условия Вода дистиллированная.Технические условия
Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия (ИСО 2435—73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия ГОСТ 13496.0—80 Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
ГОСТ 13979.0—86 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Правила приемки и методы отбора проб ГОСТ 24104—2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры
ГОСТ 4166—76 ГОСТ 4204—77 ГОСТ 4220—75 ГОСТ 6709—72 ГОСТ 9147—80 ГОСТ 9293—74
ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть! Общие требования
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
Отбор проб и подготовка их к анализу — по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13979.0, [1] и [2].
4 Метод определения остаточных количеств хлорорганических пестицидов
4.1 Сущность методаМетод основан на экстракции и очистке экстрактов хлорорганических пестицидов из анализируемой пробы способом дистилляции водяным паром на аппарате для экстракции и очистки экстрактов пестицидов (АПЛ) и количественном определении на газовом хроматографе, оснащенном детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР) или детектором захвата электронов (ДЭЗ).
4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы4.2.1 Весы лабораторные по ГОСТ24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более + 0,01 г.
4.2.2 Весы лабораторные по ГОСТ24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более + 0,0001 г.
4.2.3 Газовый хроматограф, оснащенный ДЭЗ или детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР).
4.2.4 АПЛ по нормативным документам государств, принявших стандарт (см. приложение А).
4.2.5 Испаритель вакуумный ротационный ИР—1М по нормативным документам государств, принявших стандарт.
4.2.6 Установка для перегонки органических растворителей, состоящая из круглодонной колбы вместимостью 1 дм 3 , дефлегматора длиной 30 см и диаметром 2 см, приемной колбы вместимостью 250 см 3 , аллонжа и водяной бани или колбонагревателя с температурой нагрева от 40 °С до 80 °С, снабженных регулятором температуры.
4.2.7 Шкаф сушильный по нормативным документам государств, принявших стандарт.
4.2.8 Холодильник бытовой, обеспечивающий температуру холодильной камеры 2 °С — 10 °С.
4.2.9 Микрошприц MLU-10 вместимостью 0,01 см 3 по по нормативным документам государств, принявших стандарт.
4.2.10 Колбонагреватель по нормативным документам государств, принявших стандарт.
4.2.11 Баня масляная или глицериновая.
4.2.12 Колонки хроматографические стеклянные для газового хроматографа длиной 1,0 м, диаметром 3 мм и длиной 1,5 м, диаметром 3 мм.
Колонки капиллярные длиной 30 м для газовой хроматографии, обеспечивающие максимальное разделение пестицидов.
4.2.13 Насадки для колонок: 5 %OV-17 на xpoMaTOHeN-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм)илиЗ%0\/-210 нахроматоне N-cynep (0,125 — 0,16 мм), или 5% SE-30 нахроматоне N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм).
4.2.14 Колбы перегонные К-1 — 250 — 29/32 по ГОСТ 25336.
4.2.15 Колбы Гр-25 — 14/23 по ГОСТ 25336.
4.2.16 Колбы мерные 2 — 50 — 2; 2 —100 — 2 по ГОСТ 1770.
4.2.17 Воронка В-56 — 80 ХС по ГОСТ 25336.
4.2.18 Колба коническая Кн-1 —250 — 29/32 по ГОСТ25336.
4.2.19 Цилиндры мерные 1 — 50,1 — 100 по ГОСТ 1770.
4.2.20 Пробирки с притертыми пробками градуированные вместимостью 5 см 3 и 10 см 3 по ГОСТ 1770.
4.2.21 Воронки делительные ВД-100 — 29/32, ВД-500 — 29/32 по ГОСТ 25336.
4.2.22 Пипетки 1 —2 —2 —5,1 — 2 — 2 — 10 по ГОСТ 29227.
4.2.23 Насос водоструйный по ГОСТ25336.
4.2.24 Стаканы фарфоровые вместимостью 1200 см 3 по ГОСТ9147.
4.2.25 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
4.2.26 Кислота серная, х.ч., плотностью 1,84 г/см 3 по ГОСТ4204.
4.2.28 Натрий сернокислый безводный, ч, поГОСТ4166.
4.2.29 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
4.2.30 Эфир диэтиловый (этоксиэтан) по нормативным документам государств, принявших стандарт.
4.2.31 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по нормативному документу, действующему на территории государства, принявшего стандарт.
4.2.32 Стандартные образцы (ГСО) состава хлорорганических пестицидов: ДДТ, ДДД, ДДЭ, а-ГХЦГ и у-ГХЦГ или вещества гарантированной чистоты с содержанием основного вещества не менее 90 %.
4.2.33 Азот газообразный и жидкий по ГОСТ 9293.
4.2.34 Ацетон по ГОСТ 2603.
4.2.35 Калий двухромовокислый, х.ч., по ГОСТ 4220.
Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с метрологическими и техническими характеристиками не хуже, а реактивов по качеству не ниже указанных.
4.3 Подготовка к анализу 4.3.1 Очистка н-гексанаН-гексан (2/3 объема отгонной колбы) по 4.2.27 перегоняют с помощью установки по 4.2.6, отбрасывая первую и последнюю порции отгона. Чистоту полученного н-гексана определяют с помощью газового хроматографа по 4.2.3. Для этого в коническую колбу по ГОСТ 25336 вместимостью 50 см 3 помещают 10 см 3 полученного н-гексана и упаривают его до объема
3 см 3 на колбонагревателе по 4.2.10 при температуре 65 °С в токе воздуха или азота по 4.2.33. Остаток экстракта переносят в градуированную пробирку по ГОСТ 1770 вместимостью 10 см 3 и упаривают до объема 1 см 3 . Полученный экстракт анализируют в условиях хроматографирования пробы (см. таблицу 5). Н-гексан считают очищенным и пригодным для анализа при условии отсутствия на хроматограмме пиков, мешающих определению хлорорганических пестицидов.
4.3.2 Приготовление хромовой смесиДля приготовления хромовой смеси в фарфоровый стакан по 4.2.24 помещают 50 г калия двухромовокислого по 4.2.35 и осторожно приливают по частям, тщательно перемешивая, 1 дм 3 концентрированной серной кислоты по 4.2.26. Хромовую смесь хранят в сосуде из стекла. Срок хранения хромовой смеси не ограничен.
4.3.3 Подготовка газового хроматографа4.3.3.1 Подготовка хроматографической колонки
Сухую стеклянную колонку по 4.2.12, предварительно промытую хромовой смесью, приготовленной по 4.3.2 , этиловым спиртом, затем диэтиловым эфиром по 4.2.30, заполняют насадкой по 4.2.13 с помощью вакуумного или водоструйного насоса по 4.2.23. При этом набивку колонки периодически уплотняют, постукивая по колонке деревянной палочкой. Установленную в термостате хроматографическую колонку перед работой кондиционируют в следующем режиме: 2 ч при 100 °С; 2 ч при 150 °С; 4 ч при 200 °С; 4 ч при 220 °С. При кондиционировании колонка должна быть отключена от детектора. Конди
ционирование следует проводить при смене колонки, а также после длительных перерыво в в работе. По окончании кондиционирования колонку охлаждают, подсоединяют к детектору и выводят хроматограф на рабочий режим.
4.3.3.2 Подготовку хроматографа кработе проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации.
4.3.4 Приготовление рабочих растворов хлорорганических пестицидов4.3.4.1 Приготовление основных рабочихи промежуточных растворовхпорорганических пестицидов
Основные рабочие растворы определяемых хлорорганических пестицидов с массовой концентрацией (100 + 0,5) мг/дм 3 приготавливают весовым способом отдельно для каждого хлорорганического пестицида путем растворения навески, содержащей 10 мг основного вещества, с точностью 0,1 мг в мерной колбе по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см 3 , в н-гексане, приготовленном по 4.3.1. Из основных растворов готовят промежуточные рабочие растворы массовых концентраций: 1 мг/дм 3 (раствор 1), 0,1 мг/дм 3 (раствор 2) и 0,01 мг/дм 3 (раствор 3), перенося пипеткой в мерные колбы вместимостью 100 см 3 соответственно 1 и 0,1 см 3 основного раствора хлорорганического пестицида. Для приготовления промежуточного раствора 3 с содержанием 0,01 мг/дм 3 в мерную колбу вместимостью 100 см 3 переносят
1 см 3 промежуточного раствора 1 и доводят до метки н-гексаном.
Все промежуточные растворы хранят в стеклянных флаконах с притертой пробкой или в герметично закрывающихся флаконах, снабженных пробками с тефлоновыми прокладками при температуре от
2 °С до 10 °С в течение 6 мес.
Перед приготовлением шкалы градуировочных растворов все растворы хлорорганических пестицидов выдерживают при комнатной температуре не менее 20 мин.
4.3.4.2 Приготовление шкалы градуировочных растворов
В пробирках с притертыми пробками по 4.2.20 вместимостью 5 см 3 готовят шкалу градуировочных растворов для каждого хлорорганического пестицида (см. таблицы 2, 3,4).
Градуировочные растворы хранят не более двух недель в стеклянных флаконах с притертой пробкой или в герметично закрывающихся флаконах, снабженных пробками с тефлоновыми прокладками при температуре от 2 °С до 10 °С.
Перед использованием все растворы хлорорганических пестицидов выдерживают при комнатной температуре не менее 20 мин.
Таблица 2 — Шкала градуировочных растворов для а-ГХЦГ и ДДЭ
Номер градуировочного раствора
Объем промежуточного раствора 3, см 3
Объем промежуточного раствора 2, см 3
Объем н-гексана, см 3
Массовая концентрация хлорорганического пестицида в полученном градуировочном растворе, мг/дм 3
Масса хлорорганического пестицида в 5 • 10 -3 см 3 хроматографируемой пробы (10 _6 мг)
Таблица 3 — Шкала градуировочных растворов для у-ГХЦГ
Номер градуировочного раствора
Объем промежуточного раствора 3, см 3
Объем промежуточного раствора 2, см 3
Объем н-гексана, см 3
Массовая концентрация хлорорганического пестицида в полученном градуировочном растворе, мг/дм 3
Масса хлорорганического пестицида в 5 ■ 10 _3 см 3 хроматографируемой пробы (10 _6 мг)
Таблица 4 — Шкала градуировочных растворов для ДДТ и ДДД
Номер градуировочного раствора
Объем промежуточного раствора 2, см 3
Объем промежуточного раствора 1, см 3
Объем н-гексана, см 3
Массовая концентрация хлорорганического пестицида в полученном градуировочном растворе, мг/дм 3
Масса хлорорганического пестицида в 5 ■ 10 -3 см 3 хроматографируемой пробы (10 _6 мг)
* Для ДДД. ** Для ДДТ.
4.3.5 Установление градуировочной характеристикиВ испаритель хроматографа микрошприцем по 4.2.9 вводят 5 • 10 _3 см 3 каждого градуировочного раствора (см. таблицы 2,3,4). Каждый растворхроматографируют дважды, рассчитывая среднее значение площади пика определяемого хлорорганического пестицида на хроматограмме. Затем строят градуировочный график (используя метод наименьших квадратов), откладывая по оси абсцисс (X) массу определяемого хлорорганического пестицида (т) в градуировочном растворе, а по оси ординат (У) — усредненные площади пиков определяемого хлорорганического пестицида. Получают градуировочный график, описываемый уравнением
где Л — относительный градуировочный коэффициент, который используют при вычислении результатов.
Градуировку хроматографа проводят один раз в 6 мес, а также при замене хроматографической колонки или реактивов.
Проверку стабильности работы хроматографа проводят перед анализом серии проб по результатам хроматографирования одного из градуировочных растворов. Градуировочную характеристику считают стабильной в случае, если полученное значение концентрации градуировочного раствора отличается от аттестованного значения концентрации градуировочного раствора не более чем на 10 %. Перечень показателей, по которым проводят контроль, устанавливают в лаборатории.
Если условие стабильности градуировочной характеристики не выполняется для одного градуировочного раствора, необходимо выполнить повторное измерение этого градуировочного раствора с целью исключения неудовлетворительного результата измерения.
Если градуировочная характеристика нестабильна, выясняют и устраняют причины нестабильности и повторяют контроль с использованием других градуировочных растворов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении отклонения результатов от градуировочной характеристики строят новый градуировочный график.
Компоненты идентифицируют по абсолютным значениям времени удерживания.
4.3.6 Установление поправочного коэффициентаПоправочный коэффициент Кп, учитывающий потери при пробоподготовке, обязательно устанавливают при внедрении методики в лаборатории для каждого определяемого хлорорганического пестицида. Для установления поправочного коэффициента используют метод стандартной добавки.
Значение добавки должно составлять от 50 % до 150 % содержания определяемого хлорорганического пестицида в исходной пробе. Если содержание определяемого хлорорганического пестицида в исходной пробе меньше нижней границы диапазона измерений, то значение добавки должно в 2—3 раза превышать нижнюю границу диапазона измерений.
Параллельно проводят анализ исходной пробы, поступившей в лабораторию, без добавки и со стандартной добавкой (Сд) определяемых хлорорганических пестицидов, включая все стадии пробо-подготовки. Получают две концентрации для каждого из определяемых хлорорганических пестицидов: Сх (в пробе без стандартной добавки) и Сх + д (в пробе со стандартной добавкой). Значение поправочно
го коэффициента для каждого из хлорорганических пестицидов в каждой /'-й пробе рассчитывают по формуле
Описанную процедуру повторяют не менее 5 раз для каждой /'-й пробы. Общее число проб, взятых для установления поправочного коэффициента, должно быть не менее 8—10. Поправочный коэффициент Кп для каждого хлорорганического пестицида рассчитывают как среднеарифметическое значение полученных коэффициентов К/. Значение поправочного коэффициента для каждого определяемого хлорорганического пестицида должно быть не менее 0,6.
Поправочный коэффициент проверяют при смене оператора, партии реактивов путем анализа образцов для контроля (см. 6.1.2). При получении удовлетворительных результатов контроля используют ранее установленный Кп. В случае получения отрицательных результатов контроля Кп устанавливают заново.
4.3.7 Подготовку проб к анализу проводят в соответствии с требованиями [2].
4.4 Проведение анализа 4.4.1 Подготовка аппарата для экстракции и очистки экстрактов хлорорганических пестицидов (АПЛ) и проведение экстракцииАппарат для экстракции и очистки экстрактов хлорорганических пестицидов (АПЛ) — в соответствии с приложением А.
Перед началом работы все шлифованные поверхности конусов и кранов АПЛ промывают дистиллированной водой по ГОСТ 6709.
Навеску измельченного и подготовленного к анализу комбикорма или комбикормового сырья массой 10 г помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 см 3 по ГОСТ25336, затем добавляют 100 см 3 дистиллированной воды и осторожно по стенкам колбы вливают 5 см 3 концентрированной серной кислоты. Содержимое колбы осторожно круговыми движениями перемешивают, охлаждая под струей холодной водопроводной воды, чтобы температура в колбе не поднималась выше 35 °С.
Колбу с содержимым оставляют на 5 мин, после чего в нее приливают 2 см 3 н-гексана приготовленного по 4.3.1, и соединяют с АПЛ, к керну трехходового крана подсоединяют приемную пробирку со шлифом вместимостью 10 см 3 для предотвращения потерь через трехходовой кран. К нижнему штуцеру холодильника с помощью шлангов подсоединяют холодную водопроводную воду. Верхний штуцер также с помощью шланга подсоединяют к сливной раковине.
Через верхний шлиф конденсатора заливают дистиллированную воду до уровня сливной трубки. Туда же добавляют 2 см 3 н-гексана по 4.3.1. Верхний шлиф конденсатора закрывают пробкой и ставят аппарат с круглодонной колбой на включенную масляную (глицериновую) баню или колбонагреватель, температура которых должна быть отрегулирована таким образом, чтобы кипение в колбе было равномерным без толчков и перебросов.
Для обеспечения равномерного кипения без толчков и перебросов необходимо внести в круглодонную колбу предварительно промытые и прокаленные стеклянные шарики.
Необходимо следить за уровнем конденсата в аппарате и не допускать его переброса обратно в круглодонную колбу. Для этого излишек конденсата периодически сливают с помощью трехходового крана в делительную воронку вместимостью 100 см 3 .
По истечении 1 ч работы аппарата с момента начала кипения содержимого отгонной колбы аппарат снимают с источника нагрева. После 10 мин охлаждения аппарата на воздухе содержимое конденсатора сливают в ту же делительную воронку, куда сливали излишек конденсата, используя для этого трехходовой кран. Водную фазу из делительной воронки сливают в коническую колбу, а гексановый слой переносят в круглодонную (отгонную) колбу вместимостью 50 см 3 , пропустив через слой сернокислого безводного натрия.
Водную фазу вновь помещают в делительную воронку и экстрагируют 5—8 см 3 н-гексана, а также гексановую фракцию переносят в ту же круглодонную (отгонную) колбу, пропуская через слой сернокислого безводного натрия.
Гексановый экстракт упаривают на водяной бане (температура не выше 35 °С) с использованием ротационного испарителя до объема 0,3—0,5 см 3 , а затем досуха на воздухе или в токе азота.
Сухой остаток растворяют 1 см 3 н-гексана и аликвоту из этого объема хроматографируют на газовом хроматографе.
4.4.2 Условия хроматографирования5 • 10 _3 см 3 гексанового экстракта вводят микрошприцем в испаритель газового хроматографа и анализируют в условиях, указанных в таблице 5.
Таблица 5 — Условия газохроматографического разделения хлорорганических пестицидов на различных колонках