Что собой представляет авидность антител IgG к цитомегаловирусу
В диагностике цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) важным критерием для определения стадии и формы заболевания и выработки стратегии дальнейших действий является авидность антител IgG к вирусу. Этот показатель используют при многих серологических исследованиях для определения типа и давности цитомегаловирусной инфекции в организме.
Говоря доступным языком, авидность характеризует активность связывания антител с частицами вируса. На объяснении явления такого связывания стоит остановиться подробнее.
Антитела к вирусам: немного теории
Сила иммунного ответа при любой инфекции нарастает постепенно, поэтапно вовлекая каждый из компонентов иммунной системы на определенной стадии заболевания. Выявив активность отдельного звена иммунитета, можно судить о давности инфицирования.
При первичном попадании цитомегаловируса в организм и его размножении в клетках первый этап иммунной защиты осуществляется макрофагами, которые поглощают и переваривают частицы вируса и разрушенные им клетки. При этом специфические вирусные белки, называемые антигенами, появляются на поверхности макрофагов. Т-лимфоциты распознают антиген, так как его структура отличается от нормальных белков организма, и переходят в активированное состояние. Активированные Т-клетки синтезируют вещества, стимулирующие выработку В-лимфоцитами иммуноглобулинов (антител).
Иммуноглобулины являются основными компонентами, сдерживающими размножение вирусов в организме. В диагностике цитомегаловирусной инфекции наиболее важно определение содержания иммуноглобулинов (иначе говоря, антител) IgM и IgG.
Сроки появления в крови антител к вирусу могут сильно отличаться у разных людей, в зависимости от состояния иммунной системы, наличия сопутствующих инфекций и эндокринных заболеваний.
При проникновении вируса в организм первыми вырабатываются иммуноглобулины класса М. Они могут определяться в крови через 5-7 дней после инфицирования у лиц с нормальным иммунитетом либо через 14-50 дней при сниженном иммунном статусе. IgM циркулируют в организме от 2 до 5 месяцев, поэтому их высокое содержание в сыворотке крови считают показателем недавнего первичного инфицирования.
Иногда иммуноглобулины М сохраняются в крови до двух лет, что может приводить к постановке ложноположительного диагноза. При иммунодефицитах антитела этого класса могут не вырабатываться вообще. В этом случае возможен ложноотрицательный результат.
Дополнительным критерием для установления факта инфицирования и его сроков служит определение содержания в сыворотке крови антител IgG и их авидности.
Авидность антител IgG к тому или иному вирусу обеспечивается структурой их молекулы и зависит от количества антигенсвязывающих участков. В IgG таких участков два, а в IgM – десять. В начале иммунного ответа всегда вырабатываются низкоавидные антитела, затем авидность постепенно нарастает. Иммуноглобулины класса М обладают в пять раз большей авидностью, чем IgG, но период их циркуляции в крови слишком короткий и не позволяет использовать критерий авидности для диагностики.
Кстати, полезно также почитать:
Иммуноглобулины класса G появляются в крови через 3-4 недели после заражения вирусом. В течение месяца после начала выработки их количество быстро растет, затем постепенно снижается и сохраняется на относительно постоянном уровне в течение всей жизни. Низкоавидные антитела сохраняются в крови 3-5 месяцев после инфицирования. При реактивации давней хронической инфекции выявляются высокоавидные иммуноглобулины G в высоких концентрациях. В связи с этим наличие в сыворотке крови IgG с низкой авидностью служит доказательством недавнего первичного заражения.
Как определяется авидность антител IgG
Авидность IgG к цитомегаловирусу определяется с помощью иммуноферментного анализа (ИФА). Корень «иммуно» отражает конечную цель анализа – выявление иммуноглобулинов, «ферментный» показывает наличие одного из ключевых компонентов реакции – фермента. Содержание иммуноглобулинов класса G обозначают как титр – максимальное разведение сыворотки крови, дающее положительную реакцию.
Для определения авидности сыворотку пациента разводят и вносят в лунки пластикового планшета, с поверхностью которых связан белок цитомегаловируса – антиген. Если в сыворотке есть иммуноглобулины G к вирусу, они образуют прочный комплекс с белком.
Затем в лунки добавляют мочевину, которая способна ослаблять связь между антителами и антигеном. В случае низкой авидности большая часть комплексов разрушается. Лунки промывают и выливают промывочный раствор. При этом разрушенные комплексы удаляются. На следующем этапе вносят меченые антитела к иммуноглобулинам, которые садятся на оставшиеся IgG.
В качестве метки для антител используют фермент, разрушающий какой-нибудь простой субстрат с образованием химически активных продуктов. Чаще всего меткой служит пероксидаза, а субстратом – перекись водорода. В результате их взаимодействия образуется кислород, который окисляет бесцветный компонент реакции – хромоген, что приводит к окрашиванию жидкости.
Чем выше авидность антител, тем больше иммуноглобулинов IgG остается в лунке и, соответственно, сильнее окрашивание. Степень окрашивания определяют на спектрофотометре и сравнивают с заведомо положительным и отрицательным образцами.
Параллельно ставят ту же реакцию, но без обработки мочевиной. Результат выражают в виде индекса авидности: титр IgG после обработки мочевиной делят на титр необработанных IgG и умножают на 100%.
Расшифровка результатов анализа
Интерпретация результатов определения авидности может несколько варьировать в зависимости от тест-системы, используемой в конкретной лаборатории.